逆转录的原理及主要过程(基因工程技术中最常用的获得目的基因的策略)

原理：获取组织或细胞里的总RNA，以其中的mRNA做为模板，选用Oligo或随机引物运用逆转录酶反转录成cDNA。再用cDNA为模板开展PCR扩增，而得到目的基因或检测基因表述。过程：在逆转录酶影响下以dNTP为底物，RNA为模板，tRNA为引物。

按5′→3′方位，生成一条与RNA模板互补的DNA单链。随后它和RNA模板产生RNA DNA杂交体，随后还在反转录酶的影响下，水解掉RNA链，再以此DNA为模板生成第二条DNA。逆转录过程是病毒的复制形式之一，如RNA病毒里的逆转录病毒，DNA病毒里的嗜肝DNA病毒和花菜花叶病病毒的复制均需经过逆转录。

逆转录过程在真核细胞之中同样存在，比如逆转座子和端粒DNA的增加均存在逆转录过程，需逆转录酶的催化。逆转录过程的揭示是生物学研究里的重大发现，是对中心法则的主要调整和补充。

人们通过体外模拟该过程，以样版中提取的mRNA为模板，在逆转录酶的影响下，生成出互补的cDNA，搭建cDNA文库，并从中挑选特异的目的基因。此方法已成为基因工程技术中最常用的得到目的基因的策略之一。

- END -